“Induksi Kalus Durian (Durio Zibethinus Murr) Varietas Selat dengan Pemberian Pikloram dan Benzyl Amino Purin”.
I.
PENDAHULUAN
1.1 Latar Belakang
Durian (Durio
zibethinus Murr.) adalah nama tumbuhan tropis yang berasal
dari Asia Tenggara. Nama ini diambil dari ciri khas kulit buahnya yang keras
dan berlekuk-lekuk tajam sehingga menyerupai duri. Sebutan populernya adalah “King of Fruit” (raja dari segala buah). Durian merupakan buah yang memiliki
nilai ekonomi tinggi di Indonesia dengan kisaran pasar yang luas dan beragam,
mulai dari pasar tradisional hingga pasar modern, restoran, dan hotel. Hal ini
menunjukkan bahwa komoditas durian sangat potensial untuk diusahakan karena
memiliki nilai ekonomi yang tinggi.
Indonesia menghasilkan
durian sebanyak 492.139
ton pada tahun 2010
dan meningkat menjadi 883.969
ton pada tahun 2011
(BPS, 2012). Negara-negara seperti Taiwan,
Singapura, Malaysia dan Hongkong merupakan pelanggan tetap durian dari
Indonesia. Negara-negara lain seperti Australia, Belanda dan Jepang juga mulai
mengimpor buah durian asal Indonesia. Permintaaan yang meningkat baik di dalam
maupun luar negeri saat ini belum dapat dipenuhi oleh para petani atau
pengusaha durian di Indonesia (Lakamisi, 2008). Upaya peningkatan produksi dan pengembangan durian di dalam
negeri sebenarnya masih bisa dilakukan melalui perbaikan sistem produksi
sehingga jumlah pasokan durian dengan mutu baik dapat ditingkatkan. Indonesia
memiliki potensi produsen durian yang bagus, mengingat varietas durian dan
agroklimat yang beragam sehingga durian dapat dihasilkan sepanjang tahun (Sobir
dan Rodame, 2010).
Provinsi
Jambi mempunyai prospek yang sangat baik
dalam pengembangan durian, mengingat iklim yang sesuai dengan sumber daya lahan
yang masih cukup tersedia. Produksi durian untuk provinsi Jambi sendiri pada tahun 2010
mencapai 7.037 ton (BPS Provinsi Jambi, 2010) dan masih memiliki potensi yang sangat besar untuk
ditingkatkan. Provinsi Jambi mempunyai varietas durian unggul lokal yaitu
durian selat. Durian selat
telah ditetapkan sebagai varietas unggul lokal berdasarkan keputusan Menteri
Pertanian Nomor : 492/kpts/SR. 120/12/2005 yang menetapkan bahwa durian selat sebagai varietas unggul
kerena memiliki keunggulan daging buah tebal , berwarna kuning dengan struktur
halus dan sedikit berserat serta rasa manis legit, dan memiliki biji yang kecil
(Departemen Pertanian,
2006).
Di tempat asalnya durian varietas selat hanya terdapat satu pohon induk
tunggal yang telah berumur cukup tua. Hal ini menjadi permasalahan karena pohon induk tunggal yang
berumur cukup tua dapat terancam kelangsungannya apabila terjadi kerusakan
ataupun kematian akibat faktor alam maupun faktor mahkluk hidup. Selain itu
permasalahan lain adalah ketersediaan bibit tanaman durian varietas selat yang diperbanyak dengan metode
konvensional masih terbatas. Metode konvensional yang diupayakan untuk perbanyakan bibit durian varietas selat
yaitu melalui
penyambungan (grafting). Namun kelemahan dari perbanyakan
konvensional tersebut
adalah ketersediaan biji untuk semaian batang bawah tergantung pada musim.
Demikian juga untuk batang atas bahan sambungan sangat tergantung pada fase
perkembangan tanaman induk
durian varietas selat tersebut. kemudian Biji untuk bahan batang
bawah bisa jadi membawa penyakit, sehingga bibit yang dihasilkan tidak bebas
patogen. Oleh karena itu perlu diupayakan suatu teknologi yang dapat menjamin penyediaan bibit sehat
dan berkualitas sepanjang musim.
Salah satu upaya yang
dapat dilakukan untuk penyediaan bibit durian selat adalah melalui teknik kultur
jaringan. Kultur jaringan tanaman adalah suatu upaya mengisolasi bagian-bagian tanaman
(protoplas, sel, jaringan, dan organ), kemudian mengkulturkannya pada nutrisi
buatan yang steril di bawah kondisi lingkungan terkendali sehingga
bagian-bagian tanaman tersebut dapat beregenerasi menjadi tanaman lengkap
kembali (Zulkarnain, 2009). Perbanyakan secara kultur jaringan
akan menawarkan peluang besar untuk menghasilkan jumlah bibit yang banyak dalam
waktu relatif singkat. Selain itu kultur jaringan juga dapat mempertahankan
sifat induk yang unggul dan dapat menghasilkan bibit yang bebas cendawan,
bakteri, virus dan hama penyakit (Prihandana dan Hendroko, 2006). Teknik kultur jaringan memanfaatkan kemampuan
totipotensi sel,
yaitu kemampuan untuk
membentuk tumbuhan baru yang sama dengan induknya dari bagian tumbuhan baik
organ atau jaringan serta sel
(Hartman et al., 1997). Untuk penerapan teknik kultur
jaringan durian akan berhasil dengan baik apabila syarat-syarat yang diperlukan
terpenuhi. Syarat tersebut meliputi pemilihan eksplan sebagai bahan tanam,
penggunaan medium yang cocok, keadaan yang aseptik, dan pengaturan lingkungan
yang baik (Hendaryono dan Wijayani, 1994).
Dalam kultur jaringan tahap pertama
yang perlu dilakukan yaitu menginduksi kalus dari eksplan. Pembentukan dan pertumbuhan kalus dipengaruhi
oleh beberapa faktor, diantaranya adalah
komposisi media tumbuh. Pertumbuhan dan perkembangan eksplan dipengaruhi
oleh komposisi media yang digunakan. Ada beberapa macam media tumbuh dalam
pelaksanaan kultur jaringan namun untuk tanaman yang berkayu umumnya digunakan
adalah media Woody Plant Medium (WPM).
Gunawan (1992) menyatakan bahwa
media WPM yang dikembangkan oleh Llyod dan Mc Cown pada tahun 1981, merupakan
media dengan konsentrasi ion yang rendah pada jaman sesudah penemuan media Murishage and Skoog (MS). Media ini
konsisten dengan media untuk tanaman berkayu yang dikembangkan oleh ahli lain,
tetapi sulfat yang digunakan lebih tinggi dari sulfat pada media tanaman
berkayu lain. Media tumbuh sangat menentukan perkembangan dari eksplan yang
dikembang biakkan pada kultur jaringan sehingga eksplan tersebut dapat tumbuh
dan berkembang.
Gunawan (1995) menyatakan bagian
tanaman yang dapat digunakan sebagai eksplan adalah pucuk muda, batang muda,
daun muda, kotiledon, dan hipokotil. Eksplan tanaman yang masih muda
menghasilkan tunas maupun akar adventif lebih cepat bila dibandingkan dengan
bagian yang tua. Bagian tanaman yang digunakan dalam induksi kalus durian
berasal dari daun muda, karena bagian ini termasuk jaringan meristem tanaman.
Selain itu, selnya masih aktif membelah dan terdapat banyak sel, yang masing-
masing bagian sel tersebut dapat berproliferasi membentuk kalus.
Pembentukan dan pertumbuhan kalus
selain dipengaruhi oleh media kultur yang digunakan juga dapat dipacu dengan
pemberian zat pengatur tumbuh, baik auksin maupun dikombinasikan dengan
sitokinin. Pemakaian kedua jenis zat pengatur tumbuh dalam konsentrasi tepat
dapat mengatur arah dan kecepatan pertumbuhan jaringan. Pembentukan kalus dan
organ-organ ditentukan oleh penggunaan zat pengatur tumbuh tersebut. Salah satu
zat pengatur tumbuh golongan auksin yang digunakan dalam kultur jaringan
tanaman adalah pikloram (4-Amino-3,5,6,-Trichloro
Picolinic Acid). Sedangkan zat pengatur tumbuh dari golongan sitokinin yang
sering digunakan adalah Benzyl Amino
Purin (BAP).
Pada
penelitian yang dilakukan oleh Karsinah et al., (1995), eksplan kotiledon durian yang
ditanam pada media dengan 0,1-0,5 ppm 2,4-D dan 0,5-2,0 ppm BAP menghasilkan
pertumbuhan kalus 81-97 %, dengan struktur kalus yang padat dan berwarna
hijau-kuning. Sedangkan menurut Namhomchan (1999), konsentrasi BAP 1 mgL-1 membuat tunas lateral durian berkembang secara in
vitro tetapi tidak sampai pada tahap planlet. Kalus juga dapat dihasilkan
dari daun muda durian yang ditanam pada media WPM dengan 0,5 mgL-1 2,4-D dan 0,1
mgL-1 BAP.
Hasil penelitian
Satria (1996), menunjukkan media WPM yang diperkaya dengan arang aktif 2,0 gL-1
dan komposisi konsentrasi 1,75 ppm BAP + 0,50 ppm NAA dapat memacu pertumbuhan
kalus, dan tunas terbaik pada kultur epikotil manggis, sedangkan pada ku1tur
koti1edon manggis dengan penambahan komposisi media yang sama dapat memacu
pertumbuhan plantlet dengan jumlah daun 5-9 helai. Selanjutnya hasil penelitian
Satria et al. (1997) menunjukkan
komposisi media WPM + 1,75 ppm BAP + 0,50 ppm NAA dengan bahan eksplan
hipokotil terbaik untuk inisiasi dan proliferasi kalus. Hasil penelitian
Muchtar (1996) menunjukkan bahwa pembentukan embrio somatik pada rotan manau
yang maksimum terjadi pada auksin pikloram pada perlakuan 2 ppm (8.29 μM),
kultur yang dikombinasikan dengan 2,4-D sampai 4 ppm tidak membentuk embrio
baik dikombinasikan dengan BAP maupun kinetin. Pliergo-Alfaro dan Murashige dalam
Romero et al. (2005) melaporkan
bahwa media yang mampu menginduksi kultur embriogenik dari embrio zigotik muda
alpukat adalah media yang mengandung 0.1 mgL-1 (0.41 μM) pikloram.
Hasil dari
penelitian yang dilakukan Lim Xiong Zi et
al. (2009) menyatakan bahwa pemberian zat pengatur tumbuh (ZPT) picloram 3 mgL-1 yang dikombinasikan dengan BAP 0,5 mgL-1
, 1,0 mgL-1 , 1,5 mgL-1 , 2,0 mgL-1 pada media MS , 100%
dari eksplan daun Ocimum sanctum yang diinduksi membentuk
kalus setelah 7,0 ± 0 hari. Kalus yang terbentuk berstruktur kompak,
ringan dan berwarna
hijau.
Berdasarkan uraian serta sejumlah hasil penelitian sebelumnya yang
menunjukkan pengaruh zat pengatur tumbuh pikloram dan BAP terhadap kultur
jaringan tanaman, penulis tertarik melakukan penelitian
yang berjudul “Induksi Kalus Durian (Durio Zibethinus Murr)
Varietas
Selat dengan Pemberian Pikloram dan Benzyl Amino Purin”.
1.2 Tujuan
Adapun
tujuan dari penelitian ini adalah :
1. Mengetahui
pengaruh pemberian
pikloram
dan BAP
terhadap induksi kalus
dari eksplan daun durian varietas selat.
2. Mendapatkan
konsentrasi
pemberian pikloram
dan BAP terbaik
yang menginduksi kalus dari
eksplan daun
durian varietas selat.
1.3 Kegunaan
Hasil penelitian ini diharapkan
dapat digunakan sebagai
teknologi alternatif dalam perbanyakan tanaman durian varietas selat secara kultur jaringan serta dapat dijadikan
sumber informasi bagi pihak
yang memerlukan.
1.4 Hipotesis
1. Berbagai konsentrasi pemberian pikloram
dan BAP memberikan pengaruh terhadap pembentukan
dan perkembangan kalus durian varietas selat.
2. Terdapat konsentrasi pemberian pikloram dan BAP yang terbaik dalam menginduksi
kalus durian
selat.
II.
TINJAUAN PUSTAKA
2.1
Deskripsi Durian Varietas Selat
Durian varietas selat merupakan salah satu varietas
lokal yang berasal dari provinsi
Jambi dan telah ditetapkan sebagai varietas unggul lokal berdasarkan keputusan
Menteri Pertanian Nomor : 492/kpts/SR. 120/12/2005. Saat ini durian selat mendapatkan perhatian penuh
dari Pemerintah Provinsi Jambi. Hal ini terlihat dari program Provinsi Jambi
2010-2014 di bidang pertanian khususnya hortikultura, yang mencanangkan
pengembangan 1.000.000 pohon tanaman buah-buahan termasuk durian sebagai
tanaman buah unggul lokal.
Durian selat
mempunyai karakteristik yaitu tinggi tanaman mencapai 18 m, dengan lebar tajuk
antara 9 - 12 m, bentuk tanaman menyerupai payung, warna batang berwarna kecoklatan
dan bertekstur batang kasar dan juga bentuk batang yang silindris.
Bentuk daun durian
selat adalah lonjong sempit dengan panjang daun antara 14 – 16 cm serta lebar 4
– 5 cm. tepi daun rata, ujung daun lancip, pangkal daun tumpul, permukaan daun
mengkilap, warna daun bagian atas hijau tua, warna daun bagian bawah
kecoklatan, panjang tangkai daun 2,0 – 2,5 cm. kedudukan daun menghadap ke
atas.
Bentuk bunga seperti
mangkok, warna mahkota bunga putih, warna benang sari krem kekuningan, warna
kelopak bunga krem kehijauan, jumlah bunga pertandan mencapai 10 – 12 bunga.
jumlah buah pertandan 2 buah, bentuk buah bulat, beralur, dan tidak beraturan.
Ukuran buah tingginya 30 – 33 cm, diameter 20 – 25 cm. dengan berat buah mampu
mencapai 3,5 – 4,1 kg sifat buah tidak mudah pecah, panjang tangkai buah 3 - 7
cm, warna kulit buah masak yaitu hijau sampai ke abu-abuan.
Warna daging buah
sangat menarik yaitu kuning, jika terlalu masak berwarna krem, keadaan daging
buah sedang – kering, tekstur daging buah halus sedikit berserat, dengan tebal
daging buah 1,3 – 1,5 cm. Aroma daging buah sedang (tidak tajam), dan rasa
daging buah manis legit selain itu bentuk biji lonjong agak kecil.
Varietas tergolong varietas unggul kerena memiliki
keunggulan daging buah tebal , berwarna kuning dengan struktur halus dan
sedikit berserat serta rasa manis legit, dan memiliki biji yang kecil
(Departemen Pertanian,
2006).
2.2 Perbanyakan Tanaman Melalui Teknik Kultur Jaringan
Kultur
jaringan tanaman adalah suatu
upaya mengisolasi bagian-bagian tanaman (protoplas, sel, jaringan, dan organ),
kemudian mengkulturkannya pada nutrisi buatan yang steril dibawah kondisi
lingkungan terkendali sehingga bagian-bagian tanaman tersebut dapat
beregenerasi menjadi tanaman lengkap kembali (Zulkarnain, 2009). Pernyataan tersebut didukung oleh Evans et al.,
(2003) yang menyatakan bahwa kultur jaringan adalah penanaman sel, jaringan dan
organ tanaman pada kondisi aseptik dengan lingkungan yang terkontrol.
Acquach (2004)
menjelaskan teknik kultur jaringan didasarkan pada konsep totipotensi (sel
mempunyai gen yang mampu membangun sel itu sendiri menjadi organisme lengkap
secara langsung). Menurut Evans et al., (2003), totipotensi artinya
sel-sel tanaman dapat diinduksi melalui kondisi kultur yang cocok untuk
berkembang sejalan dengan program yang dilakukan untuk membentuk tanaman
lengkap.
Aplikasi kultur
jaringan pada awalnya ialah untuk propagasi tanaman. Selanjutnya penggunaan
kultur jaringan lebih berkembang lagi yaitu untuk menghasilkan tanaman yang
bebas penyakit, koleksi plasma nutfah, memperbaiki sifat genetik tanaman,
produksi, dan ekstraksi zat-zat kimia yang bermanfaat dari sel-sel yang
dikulturkan (George et al., 2008).
Perbanyakan tanaman
secara kultur jaringan menawarkan peluang besar untuk menghasilkan jumlah bibit
tanaman yang banyak dalam waktu relatif singkat sehingga lebih ekonomis. Teknik
kultur jaringan ini dapat dilakukan sepanjang waktu tanpa tergantung musim.
Selain itu, perbanyakan tanaman menggunakan teknik in vitro mampu mengatasi kebutuhan bibit dalam jumlah besar,
serentak, dan bebas penyakit sehingga bibit yang dihasilkan lebih sehat serta
seragam. Oleh sebab itu, kini perbanyakan tanaman secara kultur jaringan
merupakan teknik alternatif yang tidak dapat dihindari bila penyediaan bibit
tanaman harus dilakukan dalam skala besar dan dalam waktu relatif singkat
(Hambali et al., 2006).
2.3 Peranan Auksin dan Sitokinin dalam Induksi Kalus
Zat pengatur tumbuh pada
tanaman adalah senyawa organik bukan hara, yang dalam jumlah sedikit dapat
mendukung, menghambat dan dapat merubah proses fisiologi tumbuhan. Zat pengatur
tumbuh dapat dibagi menjadi beberapa golongan yaitu golongan auksin, sitokinin,
giberelin, dan inhibitor. Zat pengatur tumbuh yang tergolong auksin adalah
Indol Asam Asetat (IAA), Indol Asam Butirat (IBA), dan 2,4
Dikhlorofenoksiasetat (2,4D). Zat pengatur tumbuh yang termasuk golongan
sitokinin adalah kinetin, zeatin, ribosil, dan benzil Amino Purin (BAP).
Sedangkan golongan giberelin adalah GA1, GA2, GA3, GA4, dan golongan inhibitor
adalah fenolik dan asam absisik (Hendaryono dan Wijayani, 1994).
Menurut Wetherell
(1982) bahwa zat-zat pengatur tumbuh tersebut untuk setiap spesies dan
bagian-bagian tanaman sangat berbeda-beda, juga tergantung dari tujuan masing-masing
tahap dalam propagasi. Wiendi et al.,
(1991) Melaporkan bahwa dalam aplikasinya di dalam kultur jaringan tanaman,
taraf konsentrasi disesuaikan dengan tipe organ atau eksplan, metode kultur
jaringan, dan tingkat kultur jaringan (pembuatan kalus, induksi tunas, induksi
akar dan lain-lain).
Auksin sangat dikenal sebagai hormon yang mampu
berperan menginduksi terjadinya kalus, mendorong proses morfogenesis kalus
membentuk akar atau tunas, mendorong proses embryogenesis, dan dapat
mempengaruhi kestabilan genetik sel tanaman (Santoso dan Nursanti, 2003).
Catala et al (2000), menyatakan bahwa adanya
induksi auksin dapat mengaktivasi pompa proton (ion H+) yang terletak pada
membran plasma sehingga menyebabkan pH pada bagian dinding sel lebih rendah
dari biasanya, yaitu mendekati pH pada membran plasma (sekitar pH 4,5 dari
normal pH 7). Aktifnya pompa proton tersebut dapat memutuskan ikatan hidrogen
diantara serat selulosa dinding sel. Putusnya ikatan hidrogen menyebabkan
dinding mudah merenggang sehingga tekanan dinding sel akan menurun dan dengan
demikian terjadilah pelenturan sel, pH rendah juga dapat mengaktivasi enzim
tertentu pada dinding sel yang dapat mendegradasi bermacam-macam protein atau
konstituen polisakarida yang menyebar pada dinding sel yang lunak dan lentur,
sehingga pemanjangan dan pembesaran sel dapat terjadi. Setelah pemanjangan dan pembesaran sel ini, sel terus tumbuh dengan mensintesis kembali
material dinding sel dan sitoplasma.
Menurut Wattimena
(1998), auksin alamiah yang sering terdapat pada tumbuhan adalah IAA (Asam
3-indol asetat). IAA disintesis dari triptopan pada bagian primordial daun,
daun muda dan biji yang sedang berkembang. Sedangkan auksin sintetik yang
sering digunakan adalah asam 2,4-D, NAA (Asam α-Naftalen Asetat) dan IBA (Asam
3-Indol Butirat) serta pikloram (4-Amino-3,5,6,-Trichloro
Picolinic Acid) .
Pikloram (4-Amino-3,5,6,-Trichloro Picolinic Acid)
merupakan jenis auksin dari asam pikolinik yang juga diketahui sebagai
herbisida yang kuat (Moore, 1979). Pikloram merupakan jenis auksin yang jarang
digunakan pada kultur jaringan dibandingkan jenis auksin lain namun juga
merupakan senyawa efektif yang memberikan efek pengkalusan lebih kuat
dibandingkan 2,4-D pada embrio somatik tanaman seledri (Agustina, 1997). Hal
ini dikarenakan dari semua jenis auksin sintetik hanya pikloram yang memiliki
gugus amino pada ikatan kimianya (Moree, 1979). Gugus amino tersebut dapat
dilihat pada rumus bangun kimia pikloram yang ditampilkan pada gambar 1.
Jarangnya Pikloram digunakan dalam kultur jaringan salah satunya dikarenakan
harga yang relatif lebih mahal.
Gambar 1. Rumus bangun Pikloram
Riyantini (2010)
melakukan penelitian pada kultur kotiledon tanaman jarak pagar dan mendapatkan
hasil bahwa pemberian 3 mgL-1 Pikloram pada media WPM plus
menghasilkan kalus terbaik. Selain itu hasil penelitian Purba (2009)
menunjukkan pada kultur eksplan biji
buah manggis muda pada kombinasi media WPM + pikloram 1.0 μM, media B5 + pikloram
0.5 μM, dan media B5 + pikloram 1.0 μM membentuk embrio somatik dengan
persentase yang sama yaitu 6.25 %. Konsentrasi pikloram 1.0 μM menghasilkan
embrio somatik tertinggi sebesar 4.17 %. Media B5 membentuk embrio somatik
tertinggi sebesar 3.13 %. Penelitian ini menunjukkan bahwa pikloram berpengaruh
terhadap pengkalusan eksplan tanaman pada teknik kultur jaringan.
Sitokinin adalah senyawa yang dapat meningkatkan
pembelahan sel pada jaringan tanaman serta mengatur pertumbuhan dan
perkembangan tanaman, sama halnya dengan kinetin (6-furfurylaminopurine)
(Zulkarnain, 2009). Peranan sitokinin dalam tumbuhan adalah sebagai berikut :
mengatur pembelahan sel, pembentukan organ, pencegahan kerusakan klorofil,
pembentukan kloroplas, penundaan senescens,
pembukaan dan penutupan stomata, serta perkembangan mata tunas dan pucuk.
Wattimena et al., (1992) menjelaskan
bahwa ZPT dari golongan sitokinin sangat berperan di dalam kultur jaringan
antara lain berhubungan dengan proses pembelahan sel, proliferasi tunas, dan
induksi organ. Sitokinin yang sering digunakan dalam kultur jaringan adalah BAP
(Benzil Amino Purin) dan kinetin. Menurut George et al. (2008) 6-Benzilaminopurin (BAP) merupakan salah satu
sitokinin sintetik yang aktif dan daya merangsangnya lebih lama karena tidak
mudah dirombak oleh enzim dalam tanaman. Dalam penelitian Abidin (2003) pada tanaman
gaharu menggunakan kombinasi ZPT 2,4-D 0,1 mgL-1 dan BAP 1,2 mgL-1
mampu menghasilkan jumlah pembentukan kalus yang terbanyak. Hal tersebut
menunjukkan bahwa pada konsentrasi tersebut mampu membentuk kalus dan dapat
disimpulkan bahwa pengaruh ZPT 2,4-D 0,1 mgL-1 dan BAP 1,2 mgL-1
dapat memberikan pengaruh yang nyata terhadap pembentukan jumlah kalus, bobot
kalus, dan persentase keberhasilan kalus.
Wulandari (2004)
menyatakan interaksi antara hormon auksin dan sitokinin sangat mempengaruhi pertumbuhan
morfogenesis dalam kultur sel, kultur jaringan dan organ. Konsentrasi kedua zat
pengatur tumbuh ini sering mengendalikan bentuk dan jumlah pertumbuhan suatu
kultur, baik pertumbuhan kalus atau organogenesis. Dalam kultur jaringan,
sitokinin berpengaruh terutama pada pembelahan sel. Bersama-sama dengan auksin
memberikan pengaruh interaksi terhadap diferensiasi jaringan. Pada pemberian
auksin dengan kadar yang relatif tinggi, diferensiasi kalus cenderung ke arah
pembentukan primordia akar. Sedangkan pemberian sitokinin dengan kadar yang
relatif tinggi, diferensiasi kalus akan cenderung ke arah pembentukan primordia
batang atau tunas (Hendaryono dan Wijayani, 1994).
III. METODE PENELITIAN
3.1 Tempat
dan Waktu
Penelitian ini di
laksanakan
di laboratorium Bioteknologi Tanaman,
Fakultas Pertanian,
Universitas Jambi,
mulai dari bulan April sampai
dengan bulan Agustus 2013.
3.2 Bahan dan Alat
Bahan
tanaman yang akan digunakan dalam penelitian ini adalah daun durian varietas selat yang muda yang
terdapat di lapangan yang berumur sekitar
6 bulan dalam pembibitan. Media tanam
yang digunakan adalah media WPM. Komposisi media telah terlampir pada lampiran
I. Sedangkan
zat
pengatur tumbuh yang digunakan adalah 4-Amino-3,5,6,-Trichloro
Picolinic Acid (Pikloram) dan Benzyl Amino Purin (BAP) yang konsentrasinya
sesuai dengan perlakuan. Bahan pemadat digunakan agar powder 7 grL-1, sukrosa 30 grL-1, Aquades
steril sebagai pelarut, KOH
1N, HCl 1N, sabun cair, agryept, benlock, spiritus,
dan alkohol
70% serta alkohol 96%.
Alat-alat yang digunakan yaitu Laminar Air Flow Cabinet (LAFC), lemari pendingin, autoklaf, hot plat, pH meter, magnetic stirrer,
neraca
biasa,
neraca
analitik,
gelas piala, gelas ukur, tisu,
batang pengaduk, botol kultur, plastik
wrap,
karet gelang, petridis, lampu bunsen, korek api,
kertas label, hand sprayer, gunting, pinset, lampu, rak kultur, kamera
dan alat-alat tulis.
3.3 Rancangan
Percobaan
Penelitian ini akan dilaksanakan menggunakan Rancangan Acak Lengkap (RAL) terdiri atas 15 perlakuan, yaitu :
p1b1
= WPM + 1 ppm Pikloram + 0 ppm BAP
p1b2
= WPM + 1 ppm Pikloram + 0,5 ppm BAP
p1b3
= WPM + 1 ppm Pikloram + 1 ppm BAP
p2b1
= WPM + 2 ppm Pikloram + 0 ppm BAP
p2b2
= WPM + 2 ppm Pikloram + 0,5 ppm BAP
p2b3
= WPM + 2 ppm Pikloram + 1 ppm BAP
p3b1
= WPM + 3 ppm Pikloram + 0 ppm BAP
p3b2
= WPM + 3 ppm Pikloram + 0,5 ppm BAP
p3b3
= WPM + 3 ppm Pikloram + 1 ppm BAP
p4b1
= WPM + 4 ppm Pikloram + 0 ppm BAP
p4b2
= WPM + 4 ppm Pikloram + 0,5 ppm BAP
p2b3
= WPM + 4 ppm Pikloram + 1 ppm BAP
p5b1
= WPM + 5 ppm Pikloram + 0 ppm BAP
p5b2
= WPM + 5 ppm Pikloram + 0,5 ppm BAP
p5b3
= WPM + 5 ppm Pikloram + 1 ppm BAP
Setiap perlakuan
diulang sebanyak 4 kali , sehingga dihasilkan 60 satuan percobaan. Pada masing-masing
satuan percobaan terdiri dari
2
botol kultur sehingga terdapat 120
botol
kultur. Tiap botol kultur masing-masing ditanam 2 eksplan dan semua populasi diamati.
3.4 Pelaksanaan
Penelitian
3.4.1 Sterilisasi
Alat
Untuk mencegah
terjadinya kontaminasi, sebelum penelitian dimulai semua
alat yang akan
digunakan seperti petridis, pinset, gunting, botol kultur, gelas ukur
dan peralatan lainnya dicuci bersih menggunakan sabun cair dan dibilas dengan air sampai bersih. Alat-alat selain botol
kultur dibungkus dengan kertas sebelum dimasukkan ke dalam autoklaf. kemudian disterilkan dalam autoklaf pada
tekanan 17,5 pounds per square inch (psi)
dengan suhu 1210 C selama 20 menit. LAFC disemprot dengan alkohol 70% setiap
kali digunakan dan kemudian sterilisasi dengan menyalakan lampu UV 1 jam
sebelum penanaman.
3.4.2 Pembuatan
Media
Media yang digunakan untuk media tanam adalah media
WPM dengan kombinasi ZPT (Pikloram
dan BAP). Zat kimia yang digunakan pada media ini terlampir
pada lampiran 1. Untuk memudahkan membuat media , maka
terlebih dahulu disiapkan larutan stok berdasarkan gramnya dari zat kimia penyusun media tersebut berupa stok
A, B,C, D, E, F, dan vitamin.
Larutan stok tersebut dipekatkan masing-masing sesuai dengan takaran yang
dibutuhkan. Semua masing-masing larutan dipipet dimasukkan
ke dalam gelas piala ukuran 250 mL sejumlah volume tertentu sesuai takaran yang diperlukan
untuk pembuatan media. Larutan stok zat pengatur tumbuh pikloram dan BAP dibuat dengan
konsentrasi 100 ppm. Pembuatan larutan stok pikloram menggunakan alkohol sebagai
pelarut awal. Selanjutnya ditambahkan aquades sesuai volume yang diinginkan. Larutan
stok disimpan dalam lemari es.
Langkah pertama
dalam membuat media adalah : pipet larutan stok zat kimia unsur hara (A sampai
F), serta vitamin sesuai takaran, setelah seluruh larutan
stok zat kimia
dimasukkan
ke dalam gelas piala, kemudian dimasukkan pula sukrosa dan agar kedalamnya dan
tambahkan dengan aquades hingga volume tepat 500 mL setelah itu panaskan menggunakan hotplate sambil diaduk
dengan magnetic stirrer.
pemanasan dihentikan bila larutan
media telah mendidih. Media tesebut dibagi dalam
gelas piala 100
ml. Lalu pipet larutan stok
ZPT Pikloram dan BAP
sesuai perlakuan, ukur pH media sampai 5,6 – 5,8 dengan menggunakan beberapa
tetes KOH 1% jika pH kurang dari 5,6 dan
dengan HCl
1% jika pH lebih dari 5,8. Media tersebut dituangkan ke dalam botol kultur, kemudian ditutup
dengan plastik wrap
tahan panas dan diikat dengan karet gelang dan beri label sesuai dengan
perlakuan. Kemudian media disterilkan dengan autoklaf pada suhu 1210 C dengan
tekanan 17,5 psi selama 15
menit.
3.4.3 Sumber
Eksplan
Daun durian
yang dijadikan sebagai eksplan adalah daun muda kedua dari pucuk yang berumur sekitar 4
minggu setelah munculnya
daun, kondisi daun sudah terbuka, tidak terlalu muda dan tidak terlalu tua. Eksplan daun durian tersebut diambil dari bibit yang
berasal dari biji pohon induk durian varietas selat yang terdapat di Desa Simpang
Selat Kabupaten Muaro Jambi. Bibit tersebut telah dipindahkan ke dalam polibag
dan berumur ± 6 bulan.
3.4.4 Persiapan
dan Penanaman Eksplan
Penanaman
eksplan dilakukan di Laminar Air Flow Cabinet
(LAFC) yang telah disterilkan dengan sinar ultraviolet selama minimal 1 jam dan
disemprot dengan alkohol 70%. Semua alat dan bahan yang dimasukkan ke dalam LAFC disemprot dengan alkohol 70%.
Daun muda durian selat yang akan dijadikan eksplan dicuci
bersih dengan sabun cair dan bilas dengan air yang mengalir, kemudian rendam ke dalam agryept dan benlock masing-masing 5 gram
yang dilarutkan ke dalam
air steril 100 ml. Perendaman dilakukan selama 3-4 jam. Kemudian pembilasan dilakukan di dalam
LAFC sebanyak 3 kali, selanjutnya sterilisasi dengan alkohol 70% selama 5 detik setelah itu bilas dengan air steril
dan masukkan ke dalam petridis yang kemudian potong dengan ukuran 1 cm x 1 cm.
Kegiatan penanaman
dilakukan di dalam LAFC yang sebelumnya telah disterilkan. Botol kultur, petridis, lampu spirtus, dan alat tanam
yang telah disterilkan sebelum dimasukkan disemprot terlebih dahulu dengan
alkohol 70 %. Kegiatan penanaman dilakukan sebagai berikut : semua alat-alat
yang digunakan seperti pinset dan gunting direndam dalam
alkohol 95%
agar tetap steril kemudian bakar dengan lampu spritus. Eksplan daun yang telah disterilisasi selanjutnya
dipotong-potong dengan ukuran 1 cm x 1 cm dengan menggunakan
gunting,
sebelumnya bagian tepi dan
tangkai
daun dibuang. Kemudian eksplan durian tersebut ditanam ke dalam botol kultur yag berisi media
dan perlakuannya masing-masing. Setiap botol kultur ditanam 2 eksplan. Usahakan
saat menanam, mulut botol kultur berada dekat dengan api bunsen. Kemudian tutup botol dengan plastik wrap tahan panas,ikat dengan karet gelang.
Selanjutnya botol dipindahkan ke ruang
inkubasi dan disusun di rak
kultur
sesuai berdasarkan dengan penempatan perlakuan.
3.4.5 Pemeliharaan
Pemeliharaan dilakukan untuk tujuan agar eksplan terhindar dari kontaminasi.
Pemeliharaan meliputi menjaga kebersihan ,pemisahan eksplan atau media yang telah terkontaminasi oleh
mikroorganisme dari ruang inkubasi. Selain itu dilakukan penyemprotan lokasi percobaan dan botol-botol
eksplan yang
dilakukan setiap hari dengan alkohol 70%.
3.5 Variabel
yang Diamati
3.5.1 Waktu
Muncul Kalus
Pengamatan dilakukan dengan cara mengamati eksplan
setiap
hari sampai terbentuknya kalus.
3.5.2 Persentase
Eksplan yang Membentuk Kalus
Pengamatan dilakukan pada akhir penelitian, yaitu
dengan menghitung jumlah eksplan yang membentuk kalus dibagi dengan jumlah keseluruhan eksplan yang dikulturkan
dengan rumus :
S eksplan berkalus
(%) =
S eksplan
membentuk
kalus x 100%
S seluruh eksplan
yang dikulturkan
3.5.3 Struktur
Kalus
Pengamatan dilakukan pada setiap eksplan yang membentuk
kalus. Dari kalus yang terbentuk dilihat struktur kalus yang terbentuk.
Struktur kalus dibedakan menjadi dua yaitu struktur kompak (permukaan kalus mengkilap dan seluruh permukaan
rata)
dan struktur remah (permukaan
kalus tidak mengkilap dan bergelombang). Pengamatan dilakukan setiap 1 kali seminggu hingga penelitian selesai.
3.5.4 Warna Kalus
Pengamatan dilakukan pada eksplan yang membentuk
kalus. Setiap kalus yang terbentuk diamati warna kalus yang terbentuk seperti putih,hijau, krem, coklat
muda. Pengamatan dilakukan
setiap 1 kali seminggu hingga penelitian selesai.
3.6 Analisis
Data
Untuk melihat
pengaruh perlakuan terhadap variabel yang diamati, data
hasil pengamatan dianalisis secara deskriptif.
Masukkan Komentar di bawah